熒光定量PCR主要用于用于科研及臨床的基因擴(kuò)增、定性PCR基因擴(kuò)增、熒光/酶免終點(diǎn)定量DNA基因擴(kuò)增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴(kuò)增等。基因擴(kuò)增儀適合國內(nèi)外各種PCR試劑盒傳染病類、腫瘤類、科研類。進(jìn)口基因擴(kuò)增儀主要由外殼、變溫反應(yīng)腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機(jī)界面等各部分組成。基因擴(kuò)增儀廣泛應(yīng)用于各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。
熒光定量PCR每個(gè)循環(huán)包括這三個(gè)關(guān)鍵步驟。通常，它運(yùn)行40個(gè)周期。
1、幼化：雙鏈DNA通過高溫孵育“溶解”成多肽鏈，單鏈DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)松動(dòng)。一般DNA聚合酶可以承受較大的溫度(一般為95℃)。如果免費(fèi)模板的GC含量高，時(shí)間會(huì)有所提高。
2、熱處理：在整個(gè)熱處理過程中，與開放閱讀框的緊密接觸有機(jī)會(huì)引起雜交雜交。因此，解鏈溫度(TM)應(yīng)根據(jù)計(jì)算個(gè)人所得稅的引物設(shè)計(jì)，并選用合適的溫度(一般比引物設(shè)計(jì)的TM低5℃)。
3、擴(kuò)寬：70-72℃中間，DNA聚合酶活性為，引物加寬速度可達(dá)每秒100個(gè)堿基。隨即，熒光定量PCR中擴(kuò)增的精彩畫面就小了。通常，該步驟與溫度為60°C的熱處理步驟相結(jié)合。使用隨機(jī)引物設(shè)計(jì)或寡核苷酸(DT)和隨機(jī)引物設(shè)計(jì)化學(xué)品。用于cDNA轉(zhuǎn)化的溫度取決于所選的RT酶。逆轉(zhuǎn)錄后，將約10%的cDNA轉(zhuǎn)移到單獨(dú)的試管中進(jìn)行及時(shí)的熒光定量PCR。
熒光定量PCR靈敏度高，操作起來簡便、快捷，加上對(duì)特定基因樣本純度要求低，因而被廣泛地運(yùn)用在以下檢測(cè)活動(dòng)中:
1.醫(yī)學(xué)和健康檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)臨床診斷，用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷以及基因復(fù)制。
2.DNA鑒定，常見于司法鑒定領(lǐng)域。
3.臨床分子診斷試劑和生物試劑公司藥品研發(fā)。
4.轉(zhuǎn)基因、微生物、動(dòng)物源性成分檢測(cè)，常見于醫(yī)藥衛(wèi)生及農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)領(lǐng)域。
