人肝癌氟尿嘧啶耐藥株屬于貼壁型細(xì)胞，如果漂浮的死細(xì)胞多，說明細(xì)胞有很多老化的，建議每次傳代的時候，在用胰酶消化之前，用PBS將細(xì)胞漂洗一遍，胰酶消化的時間要把握好，37℃2-3min即可，及時終止反應(yīng)，否則胰酶消化過度對細(xì)胞損傷較大，也會有很多死細(xì)胞出現(xiàn)的;吹打細(xì)胞的動作要輕柔。
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行人肝癌氟尿嘧啶耐藥株細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
人肝癌氟尿嘧啶耐藥株細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟：
1．將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中，冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染，不定時攪拌加速解凍；
2．當(dāng)細(xì)胞*解凍后，用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒；
3．將解凍后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中；
4．細(xì)胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘；
5．棄上清，將細(xì)胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中；
6．將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，CO2孵箱中培養(yǎng)；
7．是用倒置顯微鏡檢查細(xì)胞存活率以及細(xì)胞密度，如果細(xì)胞密度過高，用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度。
